| Chromatographie HE [48732] |
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| Posté le : 04/09/2007, 12:28 (Lu 16140 fois) |
Commentaire : analyses qualitatives et quantitatives avec scanner
Bonjour
Est il possible de réaliser une analyse qualitative de quelques espèces présentes dans une huile essentielle par CCM ?
je m'explique :
tout d'abord, on réalise des CCM témoins avec par exemple des esters, des aldéhydes...
ensuite, on scanne les résultats développés au KMnO4, avec un scanner traditionnel.
A l'ordianteur, on mesure précisément les fronts des taches.
Ensuite, oin fait une CCM d'une HE.
de meme,on mesure les fronts à l'ordinateur, puis on les compare à nos témoins. Si deux fronts sont identiques, on considère que l'élément témoin en question est présent dans l'HE.
ceci pour l'analyse qualitative.
et pour l'analyse quantitative, deux possibilités :
- soit on sait combien de "produit" on a mi pour faire nos CCM témoins (par exemple 2µL acetate linalyle), et on compare la luminosité de la tache avec celle correspondant à ce témouin sur la CCM d'HE (par ex: lum tache acetate lin. : 80%, lum tache he (celle au front de l'acetate de linalyle) : 40%. j'en déduis qu'il y a la moitié, soit 1µL d'acetate de linalyle dans cet echantillon de HE).
- soit on se dit que la somme des lkuminosités de chaque tache de la CCM HE est égale à 100%, apres on compare chaque luminoisité de chaque tache pour savoir le pourcentage du produit de la tache dans l'HE.
je préfère la deuxieme méthode personnellement.
Qu'en pensez vous ? cela pourait il fonctionner, ou alors me prendreriez vous pour un fou furieux    ?
Merci
Thomas
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| Re: Chromatographie HE [48743] |
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| Posté le : 04/09/2007, 13:22 (Lu 16133 fois) |
En théorie, le rapport frontal devrait pouvoir t'indiquer les composés présents dans ton huile essentielle. En pratique tu seras confronté au problème suivant : il te faudra trouver un éluant capable de bien éluer les composés... donc de bien les séparer. Or si une huile essentielle contient par exemple des terpènes, qui sont proches au niveau de leur affinité chimique, tu auras du mal à les séparer.
Quand à la vouloir réaliser une analyse QUANTITATIVE avec une CCM... ce n'est pas du tout précis, tu peux difficilement te baser sur la taille des tâches ou leur luminosité !
L'idéal serait une CPG ou une HCLP, avec un intégrateur précis et :
- une méthode d'ajouts dosés, appliquée à chacun des composés que tu veux doser, et donc avoir des composés de référence purs.
- ou une méthode d'étalon interne
Bref en résumé : ta CCM quantitative, je n'y crois pas ! 
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| Re: Chromatographie HE [48745] |
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| Posté le : 04/09/2007, 13:33 (Lu 16131 fois) |
Petit complément d'infos sur la CCM.
Lorsque l'on veut être quasiement sur qu'un composé se trouve dans un mélange, in faut réaliser un co-spotage. On réalise trois dépot sur la plaque :
- la référence
- la référence + le mélange
- le mélange.
De cette façon, on peut dire avec plus ou moins de certitude qu'un composé donné est présent dans le mélange. Si on ne cospt pas, on ne pas l'affirmer.
La CCM n'est pas une méthode suffisaement précise pour l'analyse. Certains composés présents en très faibles quantités dans les HE ne seront pas forcément visibles et tu ne pourras donc pas le identifier.
L'intensité de la tâche dépend à la fois de la concentration et des méthodes de révélation. Suivant le révélateur, la quantité de celui-ci que tu déposes sur la plaque et la température, l'intensité de la tache sera différente. Donc à moins d'être dans des conditions infomatisées (les celles qui permettraient une reproduction en pemanence identique des conditions opératoires), tu auras beaucoup de mal à utiliser ton système.
Et enfin comme le précisait Clovis, il faut trouver un élaunt capable de séparer tous les composés présents... Et parfois c'est un vrai
casse-tête nécessitant quelques dizaines d'essais...
Donc ton idée n'est pas mauvaise du tout mais pas vraiment réalisable en pratique.
Milamber.
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| Re: Chromatographie HE [48755] |
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| Posté le : 04/09/2007, 16:42 (Lu 16122 fois) |
ok
l'analyse qualitative n'a pas besoin de dévoiler TOUS les composés, mais seulement les principaux. Pour ce qui est de l'éluant, comment le choisi t on d'ailleurs ?
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| Re: Chromatographie HE [48771] |
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| Posté le : 04/09/2007, 20:19 (Lu 16105 fois) |
Des "machines" existent pour l'analyse quantitative de CCM. Mais uniquement si le produit revele sous UV. Un scanner "UV" scanne les ccm et l'intensité est analysé par un logiciel. Bien sur il faut faire des courbes d'étalonnage avant.
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| Re: Chromatographie HE [48779] |
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| Posté le : 04/09/2007, 20:52 (Lu 16102 fois) |
et ça marcherait si je suréleve une vitre au dessus de mon scanner, avec un tube UV 254nm dessous pour révélere la plaque, et le scanner la scanne ?
une vitre fine biznsur pour ne pas tropstopper les UV
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| Re: Chromatographie HE [48783] |
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| Posté le : 04/09/2007, 21:01 (Lu 16096 fois) |
Pour certains scanners, le tube de lumière blanche est de la même dimension qu'un tube pour lampe de Wood (UV). Peut-être peux-tu essayer de remplacer le tube ?
Mais cela ne résoudra pas le problème de la précision.
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| Re: Chromatographie HE [48782] |
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| Posté le : 04/09/2007, 21:00 (Lu 16098 fois) |
Je doute qu'on puisse faire une analyse quelconque (qualitative ou quantitative) d'une huile essentielle avec une technique de chromatographie en couches minces.
Les huiles essentielles contiennent des constituants volatils, Ces consittuants vont s'évaporer en partie pendant la chromatographie. On va ainsi perdre une proportion non négligeable du produit initial à cause de la méthode elle-même.
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Professeur de chimie de niveau préuniversitaire
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| Re: Chromatographie HE |
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| Posté le : 04/09/2007, 21:04 (Lu 16095 fois) |
darrigan : oui cela est une bonne idée, mais je préfère ne pas "bousiller" le scanner, on ne sait jamais :D, mais très bonne idée sinon
pour la précision, je n'ai pas besoin d'une extreme précision ! juste de quoi connaitre les 4 - 5 ou moins principaux constituants de certaines HE.
maurice : et si je travaille en environnement à température genre 10°C ? ou dans un bain d'eau froide ?
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